RKIP Plasmide Double Nickase (h): sc-401270-NIC

Il gene umano **PEBP1** codifica la **Raf kinase inhibitory protein (RKIP)**, un modulatore conservato della trasduzione del segnale che limita la segnalazione **RAF1–MEK–ERK** e può influenzare ulteriori reti chinasi coinvolte in proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. RKIP interagisce anche con le vie delle chinasi associate ai **GPCR** e contribuisce alla regolazione della segnalazione infiammatoria legata a **NF-κB** e di processi connessi all’apoptosi. Attraverso questi ruoli, RKIP contribuisce a determinare le decisioni cellulari tra crescita e morte, con effetti a valle su migrazione e programmi di **transizione epitelio-mesenchimale**. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di PEBP1/RKIP sono state associate a diversi contesti patologici, inclusi la biologia del cancro e meccanismi neuroinfiammatori o neurodegenerativi, rendendolo un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

RKIP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PEBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PEBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PEBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PEBP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.