Plasmide CRISPR d'Activation (m) RIP3: sc-425224-ACT

Le gène murin **Ripk3** code **RIP3**, une kinase sérine/thréonine qui agit comme régulateur central de la nécrose programmée (nécroptose) en aval de la signalisation des récepteurs de mort et de l’immunité innée. Après activation, RIP3 forme le nécrosome avec **RIPK1** et phosphoryle **MLKL** afin de favoriser la disruption de la membrane, tout en interagissant également avec les réponses inflammatoires dépendantes de **NF-κB** et les voies liées au stress métabolique. La signalisation dépendante de RIP3 façonne la production de cytokines et le destin des cellules immunitaires dans des contextes tels que l’infection, l’inflammation stérile et les lésions tissulaires. Une activité dérégulée de RIPK3 a été associée à des phénotypes inflammatoires et neurodégénératifs, à des dommages d’ischémie-reperfusion et à l’inflammation associée aux tumeurs, faisant de **Ripk3** un nœud clé pour les études mécanistiques de la mort cellulaire et de l’immunité innée.

RIP3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ripk3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RIP3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ripk3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ripk3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RIP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ripk3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RIP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RIP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ripk3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.