RIP/Rab Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405836-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RIP/RabO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase RIP/Rab (h) e o Plasmídeo Double Nickase RIP/Rab (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AGFG1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RIP/Rab Anticorpo (H-2): sc-166651
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RIP/Rab Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405836-NIC | 20 µg | $410.00 |
AGFG1 (RIP/Rab) codifica uma proteína que contém um domínio ArfGAP e repetições FG, implicada na endocitose mediada por clatrina e no tráfego de membranas, conectando a sinalização de pequenas GTPases à internalização de cargas e à triagem endossomal. Por meio de interações com componentes da maquinaria endocítica, RIP/Rab contribui para o brotamento de vesículas, a reciclagem de receptores e a organização espacial de complexos de sinalização na membrana plasmática. O tráfego dependente de AGFG1 pode influenciar vias a jusante ao regular a abundância e a localização de receptores e transportadores de superfície. A desregulação do controle endocítico e do tráfego mediado por Rab/Arf tem sido associada a alterações na sinalização celular e na homeostase celular, tornando AGFG1 um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos relevantes para doenças.
RIP/Rab O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AGFG1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AGFG1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AGFG1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AGFG1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.