RIN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402551-ACT

RIN1（Ras and Rab interactor 1）は、Rasエフェクターであると同時にRab5のグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として機能し、シグナル伝達とエンドサイトーシス輸送を協調させる因子です。活性化RASをRab5依存的な初期エンドソーム動態に結び付けることで、RIN1は受容体の内在化、下流MAPKシグナルの強度、ならびに細胞移動や接着を形作る細胞骨格リモデリング過程に影響を与えます。さらにRIN1はABLファミリーキナーゼやアダプター分子ネットワークとも相互作用し、膜輸送とアクチン依存的応答を制御する経路の中に位置付けられます。RIN1の発現異常やシグナル環境の破綻は、増殖因子受容体のターンオーバーの変化や腫瘍性シグナルの挙動と関連づけられており、がん生物学および細胞シグナル研究における機構解析の観点から重要です。

RIN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RIN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RIN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RIN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRIN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RIN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRIN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRIN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRIN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRIN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。