Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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Rheb Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422675
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rheb O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Rheb, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rheb Anticorpo (80-R): sc-130398
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rheb Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422675 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Rheb de camundongo codifica uma pequena GTPase relacionada a Ras que atua como um ativador central do mTORC1 nas membranas lisossomais, integrando a sinalização por fatores de crescimento, a detecção de aminoácidos e o estado energético celular para regular a síntese proteica, a autofagia e o crescimento celular. Por meio do complexo TSC1/TSC2, a atividade de Rheb é rigidamente controlada pela sinalização PI3K–AKT e por entradas responsivas ao estresse, moldando o metabolismo anabólico e a homeostase mitocondrial. A desregulação da sinalização Rheb–mTORC1 está implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento, biologia tumoral e remodelamento metabólico, tornando Rheb um nó amplamente utilizado para dissecar a sinalização nutricional e o controle do crescimento. Em sistemas murinos, a perturbação de Rheb dá suporte a estudos mecanísticos de programas de tradução dependentes de mTOR, sinalização associada a lisossomos e adaptação ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rheb (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rheb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rheb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rheb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rheb.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rheb para a investigação da sinalização de Rheb, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rheb críticos para a função Rheb
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rheb para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Rheb Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Rheb Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rheb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Rheb Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Rheb (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rheb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rheb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.