RHAMM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402431

Visão geral

O gene humano HMMR codifica o RHAMM (receptor para motilidade mediada por hialuronano), uma proteína ligante de hialuronano que atua na superfície celular e no citoplasma para coordenar a motilidade, a polaridade e a organização do fuso mitótico. O RHAMM integra sinais da matriz extracelular com a remodelação do citoesqueleto e interage com redes de sinalização como MAPK/ERK, que influenciam a proliferação e a migração. A sua localização regulada em microtúbulos e em estruturas associadas ao centrossoma relaciona o RHAMM com a progressão do ciclo celular, a montagem do fuso e a estabilidade genómica. A expressão desregulada de HMMR/RHAMM e alterações na sinalização por hialuronano têm sido associadas a fenótipos oncogénicos, incluindo aumento de invasão e metástase, sustentando a sua utilização como alvo mecanístico em investigação sobre cancro e migração celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RHAMM (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HMMR em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HMMR, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HMMR na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RHAMM.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HMMR para a investigação da sinalização de RHAMM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HMMR críticos para a função RHAMM
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HMMR para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RHAMM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RHAMM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HMMR. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RHAMM Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RHAMM (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HMMR para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HMMR definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.