RHAMM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402431

Panoramica

HMMR umano codifica RHAMM (recettore per la motilità mediata dall’acido ialuronico), una proteina legante l’acido ialuronico che agisce sulla superficie cellulare e nel citoplasma per coordinare motilità, polarità e organizzazione del fuso mitotico. RHAMM integra segnali della matrice extracellulare con il rimodellamento del citoscheletro e interseca reti di segnalazione come MAPK/ERK, che influenzano proliferazione e migrazione. La sua localizzazione regolata ai microtubuli e a strutture associate al centrosoma collega RHAMM alla progressione del ciclo cellulare, all’assemblaggio del fuso e alla stabilità genomica. Un’espressione deregolata di HMMR/RHAMM e alterazioni della segnalazione dell’acido ialuronico sono state associate a fenotipi oncogeni, tra cui aumento di invasione e metastasi, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico nella ricerca sul cancro e sulla migrazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RHAMM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HMMR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HMMR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HMMR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RHAMM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HMMR per lo studio della segnalazione di RHAMM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HMMR critici per la funzione di RHAMM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HMMR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RHAMM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RHAMM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HMMR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RHAMM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RHAMM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HMMR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HMMR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.