REV1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425035

Übersicht

Rev1 kodiert REV1, eine DNA-Polymerase der Y-Familie, die in der translesionellen DNA-Synthese als spezialisierte Gerüstkomponente und als Deoxycytidyl-Transferase fungiert und so die Replikation über sperrige DNA-Läsionen hinweg ermöglicht. REV1 koordiniert das Umgehen von Läsionen durch Interaktion mit anderen TLS-Polymerasen und ist in Netzwerke der DNA-Schadensantwort eingebunden, die das Fortschreiten der Replikationsgabel und die Genomintegrität sichern. In Mauszellen beeinflusst die Rev1-Aktivität die Mutageneseraten sowie das Gleichgewicht zwischen fehleranfälliger und fehlerfreier Läsionsverarbeitung unter Replikationsstress. Fehlregulierte REV1-abhängige Signalwege sind relevant für Studien zur Genominstabilität, zu Mechanismen der Karzinogenese und zur zellulären Empfindlichkeit gegenüber genotoxischen Stressoren.

Das REV1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rev1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rev1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rev1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die REV1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rev1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der REV1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rev1-Exone abzielen, die für die REV1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rev1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom REV1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom REV1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rev1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das REV1 HDR-Plasmid (m) und REV1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rev1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rev1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.