reticulocalbin-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410060-ACT

Il gene umano **RCN3** codifica la **reticulocalbina-3**, una proteina luminale del reticolo endoplasmatico (RE) che lega Ca²⁺, appartenente alla famiglia **CREC**, implicata nell’omeostasi della via secretoria e nel controllo di qualità delle proteine. La reticulocalbina-3 è associata ai processi di ripiegamento e traffico proteico nel RE, che si intersecano con la segnalazione dello stress del RE e con le reti di proteostasi, influenzando potenzialmente la differenziazione cellulare e l’organizzazione della matrice extracellulare. La regolazione alterata di fattori residenti nel RE con funzione simile a chaperoni, come RCN3, è stata studiata in contesti ad alta richiesta secretoria, inclusi il rimodellamento associato alla fibrosi e gli adattamenti del microambiente tumorale, a supporto della sua rilevanza come modulatore di programmi cellulari responsivi allo stress.

reticulocalbin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RCN3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

reticulocalbin-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RCN3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RCN3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di reticulocalbin-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RCN3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da reticulocalbin-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via reticulocalbin-3 nelle cellule tumorali con espressione di RCN3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.