reticulocalbin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410060-ACT

O RCN3 humano codifica a reticulocalbina-3, uma proteína luminal do retículo endoplasmático (RE) ligadora de Ca²⁺ da família CREC, implicada na homeostase da via secretória e no controle de qualidade de proteínas. A reticulocalbina-3 está associada a processos de dobramento e tráfego de proteínas no RE que se cruzam com a sinalização de estresse do RE e com redes de proteostase, o que pode influenciar a diferenciação celular e a organização da matriz extracelular. A regulação alterada de fatores semelhantes a chaperonas residentes no RE, como o RCN3, tem sido estudada em contextos de alta demanda secretória, incluindo remodelamento associado à fibrose e adaptações do microambiente tumoral, sustentando sua relevância como modulador de programas celulares responsivos ao estresse.

reticulocalbin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RCN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

reticulocalbin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RCN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RCN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de reticulocalbin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RCN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de reticulocalbin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via reticulocalbin-3 em células tumorais com expressão de RCN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.