REP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417782

Panoramica

CHML codifica la Rab escort protein 2 (REP-2), uno chaperone citosolico che si lega alle Rab GTPasi appena sintetizzate e le presenta alla Rab geranilgeraniltransferasi per la prenilazione, una modifica lipidica necessaria per l’associazione alle membrane. Attraverso questa fase di maturazione delle Rab, REP-2 supporta vie di traffico vescicolare che includono il trasporto endosomiale e del Golgi, l’esocitosi e le dinamiche di membrana legate all’autofagia. L’alterazione della prenilazione delle Rab o del loro ciclo funzionale può perturbare l’identità degli organelli e lo smistamento intracellulare dei carichi, processi spesso implicati nella neurodegenerazione, nei disturbi della retina e, più in generale, in fenotipi di stress cellulare correlati al traffico. CHML è studiato anche in contesti in cui la segnalazione dipendente dalle Rab e il rimodellamento delle membrane si intersecano con la funzione delle cellule immunitarie e la biologia delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REP-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHML in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHML insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHML a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHML per lo studio della segnalazione di REP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHML critici per la funzione di REP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHML per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal REP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal REP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHML. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal REP-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR REP-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHML per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHML definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.