RELA/NFκB p65 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422642-ACT

Rela は、正統（カノニカル）NF-κB シグナル伝達の中核的な転写制御因子である RELA/NFκB p65 サブユニットをコードしており、炎症、自然免疫および獲得免疫、細胞生存、ストレス応答における誘導性遺伝子プログラムを制御する。マウス細胞では、p65 は主に NFKB1/p50 と機能的な二量体を形成し、IKK による IκB 阻害因子の分解に続いて核へ移行することで、TNF、IL-1、TLR、抗原受容体、DNA 損傷経路からのシグナルを統合する。RELA 依存的な転写は、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、抗アポトーシス因子を調節し、マクロファージ活性化、リンパ球機能、組織恒常性を形作る。NF-κB/RELA 活性の破綻は、慢性炎症状態、自己免疫、腫瘍性シグナル伝達ネットワークと関連しており、Rela は免疫調節およびストレス適応的転写の機序研究において頻繁に標的とされる。

RELA/NFκB p65 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Relaの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RELA/NFκB p65 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Rela 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRela転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RELA/NFκB p65の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRela遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRELA/NFκB p65依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRela発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRELA/NFκB p65経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。