Reelin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401862-ACT

ヒトRELNは、脳の発生期および成体の神経回路において、神経細胞の移動、大脳皮質の層構造形成、シナプス形成を統括する大型の分泌性細胞外マトリックス糖タンパク質であるリールリン（reelin）をコードする。リールリンは主にリポタンパク質受容体VLDLRおよびLRP8（ApoER2）を介してシグナルを伝達し、アダプター分子DAB1を活性化することで、Srcファミリーキナーゼや下流の細胞骨格ダイナミクスを調節し、神経突起の伸長やシナプス可塑性を形作る。RELN依存性経路は、グルタミン酸作動性伝達、樹状突起スパインのリモデリング、ならびにネットワークの接続性に影響する活動依存的遺伝子プログラムとも交差する。RELN発現またはシグナル伝達の破綻は神経発達性・精神神経疾患様の表現型と関連づけられており、回路形成やシナプス機能の機構研究における重要な標的となっている。

Reelin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RELNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Reelin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RELN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRELN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Reelinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRELN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるReelin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRELN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるReelin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。