RBM4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403993-ACT

RBM4 (proteína 4 com motivo de ligação a RNA) é uma proteína multifuncional de ligação a RNA que regula o splicing alternativo do pré‑mRNA, a estabilidade do mRNA e o controle da tradução, conectando o processamento de RNA a transições de estado celular. Ela participa de processos associados ao spliceossomo e ajuda a coordenar programas de expressão gênica durante a diferenciação, respostas ao estresse e a remodelação, relacionada ao ciclo celular, de isoformas de transcritos. Decisões de splicing dependentes de RBM4 podem influenciar os resultados de sinalização ao alterar o equilíbrio de isoformas proteicas em vias que governam o metabolismo e a organização do citoesqueleto. A expressão ou atividade desregulada de RBM4 tem sido associada a padrões de splicing aberrantes observados em câncer e em contextos de doenças neuromusculares e metabólicas, tornando-a um ponto útil para o estudo de mecanismos de doença centrados em RNA.

RBM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBM4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBM4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBM4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBM4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBM4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBM4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBM4 em células tumorais com expressão de RBM4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.