RBM35A CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405645-ACT-2

ヒトESRP1（epithelial splicing regulatory protein 1；RBM35A）は、GUに富むモチーフを認識して上皮細胞に特徴的な選択的スプライシング・プログラムを制御するRNA結合性のスプライシング因子をコードしている。ESRP1は、細胞間接着、細胞骨格の構築、極性、ならびに上皮―間葉転換（EMT）に関連するシグナル伝達ネットワーク（FGFRやCD44のアイソフォーム制御と交差する経路を含む）に関与する転写産物におけるアイソフォーム選択を協調的に調節することで、上皮としてのアイデンティティの維持に寄与する。ESRP1を介したスプライシングの破綻は、複数の上皮由来がんにおいてEMT状態の変化や腫瘍進展に関わる表現型と関連づけられており、転移に伴うリモデリングの過程で観察されるRNAプロセシングの変化における重要な結節点であることが示唆される。ESRP1の遺伝子編集は、スプライシング依存的な制御機構の解析、アイソフォーム解像度のトランスクリプトミクス、ならびにヒト細胞モデルにおけるEMTおよび上皮分化プログラムの機能的検証を可能にする。

RBM35A CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ESRP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBM35A CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における ESRP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はESRP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBM35Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のESRP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBM35A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびESRP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBM35A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。