Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422605

概要

Rasgrf1は、カルシウム／カルモジュリンによって制御されるグアニンヌクレオチド交換因子であり、RasファミリーGTPアーゼを活性化して神経活動を下流のMAPK/ERKシグナル伝達へと結び付けるRas-GRF1をコードする。マウスでは、Ras-GRF1はRasおよびRapに連なる経路の調節を介して、シナプス可塑性、学習・記憶、ならびに活動依存的遺伝子発現に寄与し、さらに一部の組織ではインスリン／IGF関連シグナルや増殖制御にも関与する。これらのシグナル結節を通じて、Ras-GRF1は細胞増殖、分化、細胞骨格ダイナミクスに影響を及ぼし、神経発達表現型やRas経路の破綻した生物学の研究において重要な対象となる。Ras-GRF1機能の変化は、異常な神経シグナル伝達や腫瘍性経路の再構築といった文脈で検討されており、経路解析のための機構的な切り口としての有用性が支持されている。

Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRasgrf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rasgrf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rasgrf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ras-GRF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ras-GRF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rasgrf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ras-GRF1の機能に不可欠なRasgrf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rasgrf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRas-GRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rasgrf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ras-GRF1 HDRプラスミド（m）および Ras-GRF1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRasgrf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRasgrf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。