RARβ/Retinoic Acid Receptor β Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432322-ACT

Rarb codifica o RARβ, um receptor nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com o RXR e se liga a elementos de resposta ao ácido retinoico para regular programas transcricionais que controlam decisões de destino celular. Em células de camundongo, o RARβ integra a sinalização por retinoides ao remodelamento da cromatina para coordenar a diferenciação, o padrão tecidual e o controle homeostático da proliferação e da apoptose. A atividade do RARβ interage com redes gênicas do desenvolvimento e do metabolismo e influencia a especificação de linhagens neuronais e epiteliais. A expressão desregulada de Rarb ou a alteração do seu output de sinalização é frequentemente estudada no contexto de diferenciação aberrante, mudanças na função imune e de barreira, e reprogramação transcricional associada ao câncer.

RARβ/Retinoic Acid Receptor β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rarb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RARβ/Retinoic Acid Receptor β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rarb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rarb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RARβ/Retinoic Acid Receptor β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rarb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RARβ/Retinoic Acid Receptor β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RARβ/Retinoic Acid Receptor β em células tumorais com expressão de Rarb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.