Ran BP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422596

Panoramica

Ranbp2 codifica Ran BP-2 (Nup358), un importante componente dei filamenti citoplasmatici del complesso del poro nucleare che coordina il trasporto nucleo-citoplasmatico dipendente dalla GTPasi Ran e contribuisce all’omeostasi dell’involucro nucleare. In qualità di ligasi E3 di SUMO, regola la SUMOilazione di specifici cargo e partecipa a processi che includono la progressione mitotica, la dinamica dei microtubuli e la proteostasi. Ran BP-2 interagisce anche con vie che governano l’esportazione dell’mRNA e le risposte allo stress, collegando il trasporto nucleare al controllo del ciclo cellulare e all’adattamento cellulare. La disregolazione del traffico nucleo-citoplasmatico e della regolazione dipendente da SUMO è stata associata a fenotipi neurodegenerativi e ad un’alterata segnalazione immunitaria, rendendo Ranbp2 un nodo utile per studi meccanicistici in sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran BP-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ranbp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ranbp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ranbp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ran BP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ranbp2 per lo studio della segnalazione di Ran BP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ranbp2 critici per la funzione di Ran BP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ranbp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ran BP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ran BP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ranbp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ran BP-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ran BP-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ranbp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ranbp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.