Ran BP-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422596

Descripción general

Ranbp2 codifica Ran BP-2 (Nup358), un componente principal de los filamentos citoplasmáticos del complejo del poro nuclear que coordina el transporte nucleocitoplasmático dependiente de la GTPasa Ran y contribuye a la homeostasis de la envoltura nuclear. Como ligasa E3 de SUMO, regula la SUMOilación de determinadas cargas y participa en procesos que incluyen la progresión mitótica, la dinámica de los microtúbulos y la proteostasis. Ran BP-2 también se integra con vías que regulan la exportación de ARNm y las respuestas al estrés, vinculando el transporte nuclear con el control del ciclo celular y la adaptación celular. La desregulación del tráfico nucleocitoplasmático y de la regulación dependiente de SUMO se ha asociado con fenotipos neurodegenerativos y alteraciones de la señalización inmunitaria, lo que convierte a Ranbp2 en un nodo útil para estudios mecanísticos en sistemas de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ran BP-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ranbp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ranbp2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ranbp2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ran BP-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ranbp2 para la investigación de la señalización de Ran BP-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ranbp2 críticos para la función de Ran BP-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ranbp2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ran BP-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ran BP-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ranbp2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ran BP-2 (m) y el plásmido HDR Ran BP-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ranbp2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ranbp2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.