RAMP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401396-ACT

受容体活性調節タンパク質1（RAMP1）は、クラスB GPCR複合体の輸送（トラフィッキング）、リガンド特異性、ならびにシグナル出力を制御する単回膜貫通型のアクセサリーサブユニットであり、特にカルシトニン受容体様受容体（CALCRL）とパートナーを組んで標準的なCGRP受容体を形成することでよく知られています。RAMP1は受容体の成熟や細胞表面への局在化を形作ることで、CGRPによって駆動されるcAMP/PKAシグナル伝達と、その下流で神経血管トーンや炎症性ニューロペプチド応答を調節する転写プログラムに影響を与えます。RAMP1依存的なシグナルは、片頭痛の生物学的基盤に関わる機構や、より広範な神経血管および疼痛関連プロセスに広く関与すると考えられており、心血管調節や気道生理においても研究されています。そのため、RAMP1発現の調節は、関連するヒト細胞モデルにおいてGPCRアクセサリータンパク質の機能、受容体薬理、そして文脈依存的なシグナルバイアスを解析する上で有用です。

RAMP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAMP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RAMP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAMP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAMP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RAMP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAMP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRAMP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAMP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRAMP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。