RAI15 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405878

Visão geral

SMYD5 codifica uma metiltransferase de lisina contendo domínios SET e MYND, implicada na regulação da cromatina e no controle transcricional, sustentando programas dependentes do contexto que moldam a identidade celular e as respostas ao estresse. Por meio da modulação da metilação de histonas e de proteínas, a SMYD5 está ligada a vias epigenéticas que influenciam processos dependentes do DNA, incluindo a montagem de cromatina acoplada à replicação e a dinâmica da expressão gênica. A atividade desregulada de SMYD5 tem sido associada a sinalização inflamatória alterada e a estados transcricionais oncogênicos em múltiplos sistemas modelo, tornando-a relevante para dissecar mecanismos de progressão tumoral e fenótipos relacionados ao sistema imune. Em células humanas, a investigação de redes dependentes de SMYD5 pode esclarecer como modificadores epigenéticos integram sinais para regular proliferação e diferenciação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RAI15 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SMYD5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SMYD5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SMYD5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RAI15.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SMYD5 para a investigação da sinalização de RAI15, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SMYD5 críticos para a função RAI15
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SMYD5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RAI15 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RAI15 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SMYD5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RAI15 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RAI15 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SMYD5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SMYD5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.