Rad51 Plasmide Double Nickase (h): sc-400100-NIC

Il gene umano **RAD51** codifica Rad51, una recombinasi centrale che catalizza la ricerca di omologia e lo scambio di filamenti di DNA durante la ricombinazione omologa, consentendo la riparazione ad alta fedeltà delle rotture a doppio filamento del DNA e delle forcelle di replicazione bloccate. Rad51 agisce a valle di BRCA1/BRCA2 e coopera con RAD52, PALB2 e fattori associati alla replicazione per preservare la stabilità del genoma nelle fasi S e G2. Attraverso i suoi ruoli nelle risposte allo stress replicativo, nella ricombinazione meiotica e nella riparazione del DNA basata sulla cromatina, l'attività di RAD51 influenza la segnalazione dei checkpoint e lo scambio tra cromatidi fratelli. La disregolazione dell'espressione o della funzione di RAD51 è associata a fenotipi di instabilità genomica ed è spesso studiata nel contesto della biologia tumorale, dei difetti ereditari di riparazione del DNA e della sensibilità ad agenti che danneggiano il DNA in sistemi sperimentali.

Rad51 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD51 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD51. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD51. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD51 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.