Rad21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422577

概要

Rad21は、姉妹染色分体の接着を安定化し、高次のクロマチン構造を組織化するコヒーシン複合体の中核サブユニットをコードしています。コヒーシンのロードと細胞周期に応じた制御された解離を通じて、RAD21は正確な染色体分配、DNA二本鎖切断修復、複製フォークの安定性を支え、ゲノム維持経路と結び付いています。さらに、RAD21により形成されるクロマチンループは、エンハンサー–プロモーター間コンタクトの調整やCTCFなどの因子との相互作用を介して転写制御にも寄与します。RAD21を含むコヒーシン構成要素の破綻や制御異常は染色体不安定性やコヒーシン関連の発生表現型と関連することから、Rad21はマウスモデルにおける機構解析の重要な標的となっています。

Rad21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRad21遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rad21内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rad21のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rad21タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rad21シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rad21欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rad21の機能に不可欠なRad21エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rad21ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rad21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRad21 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rad21遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rad21 HDRプラスミド（m）および Rad21 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRad21ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRad21標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。