Rab 9B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412147-ACT

RAB9B codifica a pequena GTPase Rab9B, um membro da família RAB que coordena a dinâmica do tráfego vesicular por meio de um ciclo regulado de GDP/GTP. A Rab9B está implicada no transporte do endossomo tardio para a rede trans-Golgi e na maturação endossomal, processos que influenciam a entrega aos lisossomos, a renovação de receptores de membrana e a homeostase global do sistema endomembranar. Ao moldar a triagem intracelular e o tráfego retrógrado, a atividade de RAB9B pode modular a saída de sinalização e a função de organelas em tipos celulares com alto fluxo de membranas. A desregulação de vias de tráfego endolisossomal é amplamente relevante para estudos de neurodegeneração, biologia de infecções e adaptação de células cancerosas, tornando RAB9B um ponto útil para investigação mecanística.

Rab 9B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB9B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 9B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB9B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB9B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 9B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB9B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 9B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 9B em células tumorais com expressão de RAB9B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.