Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 5C: sc-403247-ACT

El gen humano **RAB5C** codifica Rab5C, una pequeña GTPasa que regula la fusión de endosomas tempranos, la endocitosis mediada por receptores y la dinámica del tráfico endosomal que determina el reciclaje de membrana y la duración de la señalización. Al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP, Rab5C coordina el reclutamiento de efectores implicados en el anclaje de vesículas, la clasificación de carga y la remodelación de fosfoinosítidos, influyendo en vías como el recambio de receptores de factores de crecimiento y la captación de nutrientes. La actividad de la familia Rab5 se integra con el transporte citoesquelético y el direccionamiento de endosomas hacia lisosomas, afectando procesos como la proliferación, la polaridad y las respuestas a señales extracelulares. La desregulación del tráfico endocítico y de la señalización dependiente de Rab5 se ha vinculado con la hiperactivación de receptores asociada al cáncer, con mecanismos neurodegenerativos relacionados con déficits en el transporte vesicular y con la biología de infecciones en las que patógenos explotan las rutas de entrada endosomal del hospedador.

Rab 5C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB5C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 5C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB5C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB5C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 5C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB5C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 5C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 5C en células tumorales con expresión de RAB5C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.