Rab 27b Plasmide Double Nickase (h): sc-403498-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 27b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab 27b Double Nickase Plasmid (h) e il Rab 27b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAB27B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 27b Antibody (1596CT245.254.49): sc-517602
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 27b Plasmide Double Nickase (h) | sc-403498-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 27b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403498-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB27B codifica la piccola GTPasi Rab27b, un regolatore chiave del traffico vescicolare che coordina l’ancoraggio e la fusione dei granuli secretori e degli esosomi con la membrana plasmatica. Rab27b funziona alternando ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP e interagisce con reti di effettori coinvolte nel rimodellamento del citoscheletro, nella dinamica delle membrane e nell’esocitosi regolata. Nelle cellule umane, il traffico dipendente da RAB27B influenza programmi secretori rilevanti per la segnalazione immunitaria e infiammatoria, il rilascio dei granuli piastrinici e neutrofili e la comunicazione tumore–stroma tramite vescicole extracellulari. Un’espressione o un’attività deregolate di RAB27B sono state associate a fenotipi di secrezione vescicolare alterati osservati nella progressione tumorale e nel comportamento metastatico, a sostegno del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca sul trasporto di membrana.
Rab 27b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAB27B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAB27B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAB27B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAB27B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.