Rab 27b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403498-ACT

RAB27B codifica a pequena GTPase Rab27b, membro da família Rab que regula etapas do tráfego de membranas necessárias para a ancoragem (docking), preparação (priming) e fusão de vesículas secretórias com a membrana plasmática. Por meio de interações com proteínas efetoras, como proteínas do tipo sinaptotagmina, e parceiros de ligação específicos de Rab27, a Rab27b coordena a exocitose regulada, a maturação de grânulos e a liberação de carga em contextos secretórios e relacionados ao sistema imune. Essa via contribui para processos como a secreção de grânulos densos de plaquetas, o tráfego de vesículas endócrinas e o controle da liberação de vesículas extracelulares/exossomos, conectando o RAB27B à comunicação intercelular e à sinalização no microambiente. A desregulação do tráfego dependente de Rab27b tem sido associada a programas secretórios alterados em condições inflamatórias e na biologia do câncer, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de secreção relacionada à metástase, interações tumor–estroma e modulação imune.

Rab 27b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB27B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 27b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB27B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB27B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 27b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB27B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 27b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 27b em células tumorais com expressão de RAB27B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.