Rab 1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402021-ACT

RAB1B codifica a pequena GTPase Rab1B, um regulador central do tráfego vesicular do RE para o Golgi e dentro do próprio Golgi, que coordena a triagem de cargas, o ancoramento de membranas e a fusão dependente de SNAREs. Ao alternar entre estados ligados a GDP e a GTP, a Rab1B controla a dinâmica da via secretória inicial, influenciando a homeostase de organelas, o processamento de glicoproteínas e a proteostase secretória. A sinalização da família Rab1 interage com programas de autofagia e de tráfego responsivo ao estresse, conectando o transporte de membranas ao sensoriamento de nutrientes e ao controle de qualidade. A desregulação do tráfego mediado por Rab1 tem sido associada a fenótipos celulares relevantes para neurodegeneração, biologia de infecções e sinalização oncogênica, por meio de secreção alterada e respostas de estresse de organelas.

Rab 1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 1B em células tumorais com expressão de RAB1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.