Rab 12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-415015

概要

RAB12は、エンドソーム〜リソソーム系における膜輸送を制御する低分子GTPアーゼであるRab12をコードしています。Rab12は後期エンドソームおよびリソソームのダイナミクスに寄与し、カーゴの選別、受容体のターンオーバー、オートファジー関連分解経路に影響を与えます。細胞内輸送とプロテオスタシスを調節することで、Rab12は栄養状態に対する細胞応答やストレスシグナル伝達ネットワークにも影響し得ます。Rab GTPアーゼ依存的な輸送の破綻は、代謝異常や浸潤性表現型の変化と関連づけられており、疾患関連の細胞モデルにおけるRAB12の検討が支持されます。

Rab 12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAB12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAB12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAB12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rab 12タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rab 12シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAB12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rab 12の機能に不可欠なRAB12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAB12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rab 12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRab 12 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAB12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rab 12 HDRプラスミド（h）および Rab 12 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAB12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAB12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。