R-Ras Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402126-ACT

RRAS codifica a pequena GTPase R-Ras, um nó de sinalização da família Ras que alterna entre estados ligados a GDP e a GTP para regular a adesão dependente de integrinas, a dinâmica do citoesqueleto e o tráfego de membranas. Em células humanas, a R-Ras contribui para o controle da migração celular e da sinalização de sobrevivência por meio de vias que se cruzam com as cascatas PI3K/AKT e MAPK, influenciando o comportamento de células endoteliais e de músculo liso. Alterações na atividade de RRAS têm sido associadas à remodelação vascular desregulada e a programas aberrantes de motilidade celular observados no câncer e em distúrbios do desenvolvimento. Essas propriedades tornam RRAS um alvo útil para dissecar a sinalização mediada por adesão, fenótipos de invasão e a conectividade específica de contexto das redes Ras.

R-Ras O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RRAS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

R-Ras O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RRAS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RRAS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de R-Ras. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RRAS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de R-Ras no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via R-Ras em células tumorais com expressão de RRAS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.