quiescin Q6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405059-ACT

ヒトQSOX1は、FAD依存性のスルフヒドリルオキシダーゼであるquiescin Q6をコードしており、ジスルフィド結合の形成を触媒し、分泌経路および細胞外マトリックスにおける酸化的タンパク質フォールディングに寄与します。QSOX1は、ジスルフィド結合を生成し、その副産物として過酸化水素を産生することで、レドックス恒常性、タンパク質成熟、ならびに細胞接着や細胞移動に影響するマトリックスのリモデリング過程に作用します。QSOX1の活性は、腫瘍微小環境の組織化の変化、線維化に伴うリモデリング、炎症性シグナル伝達の文脈と関連づけられており、疾患関連の細胞外プロテオスタシスを研究するうえで有用な解析対象となります。また、その発現と機能は、分泌、ER／分泌トラフィッキング、レドックス依存性シグナル伝達を協調させるストレス適応経路とも関係します。

quiescin Q6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性QSOX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

quiescin Q6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における QSOX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はQSOX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性quiescin Q6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のQSOX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるquiescin Q6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびQSOX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるquiescin Q6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。