PYST2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404642-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PYST2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PYST2 Double Nickase Plasmid (h) e il PYST2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DUSP7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PYST2 Antibody (D-8): sc-377106
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PYST2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PYST2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfatasi a doppia specificità 7 (DUSP7), nota anche come PYST2, è una fosfatasi diretta contro le MAPK che defosforila e inattiva preferenzialmente ERK1/2, modulando ampiezza e durata della segnalazione indotta dai mitogeni. Fornendo un feedback negativo all’interno della cascata Ras–Raf–MEK–ERK, DUSP7 contribuisce a regolare proliferazione, differenziamento e programmi trascrizionali adattativi allo stress. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DUSP7 sono state associate a una deregolazione dell’output della via MAPK nei tumori e in altre condizioni in cui la segnalazione ERK governa le decisioni sul destino cellulare, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici della plasticità della segnalazione. Nei modelli cellulari umani, l’analisi della funzione di DUSP7 può chiarire come l’attenuazione mediata da fosfatasi influenzi gli effettori a valle, inclusi i geni di risposta immediata e i regolatori del ciclo cellulare.
PYST2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DUSP7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DUSP7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DUSP7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DUSP7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.