PYK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400708-ACT

PTK2B codifica a tirosina quinase não receptora PYK2 (protein tyrosine kinase 2 beta), um nó de sinalização responsivo a Ca2+ e a integrinas que conecta sinais extracelulares à remodelação do citoesqueleto e à expressão gênica. A PYK2 participa de vias de adesão focal e dinâmica de actina e interage com quinases da família Src, com a sinalização MAPK/ERK e com programas transcricionais a jusante que regulam adesão, migração e respostas inflamatórias. Em linhagens imunes e mieloides, a PYK2 modula a sinalização induzida por quimiocinas e citocinas e contribui para a ativação da imunidade inata e para o tráfego de leucócitos. A desregulação da sinalização de PTK2B/PYK2 tem sido implicada em mecanismos neuroinflamatórios e neurodegenerativos, em redes de sinalização associadas a autoimunidade e em contextos de invasão tumoral, tornando-a um alvo útil para estudos de perturbação de vias.

PYK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTK2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PYK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTK2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTK2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PYK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTK2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PYK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PYK2 em células tumorais com expressão de PTK2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.