Puratrophin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411825

Visão geral

PLEKHG4 codifica a Puratrofina 1, uma proteína multidomínio implicada na regulação neuronal e do citoesqueleto por meio da sinalização de GTPases da família Rho. Como uma proteína putativa relacionada a fatores de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para Rho, ela está associada à modulação da dinâmica da actina, do tráfego de membranas e da arquitetura de neuritos, processos centrais para a manutenção sináptica e o transporte intracelular. A expressão de PLEKHG4 é enriquecida no sistema nervoso, sustentando papéis no desenvolvimento neuronal e na estabilidade de circuitos. Variações genéticas e alterações na função da Puratrofina 1 têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e de distúrbios do movimento, incluindo ataxia espinocerebelar, o que motiva estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Puratrophin 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PLEKHG4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PLEKHG4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PLEKHG4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Puratrophin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PLEKHG4 para a investigação da sinalização de Puratrophin 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PLEKHG4 críticos para a função Puratrophin 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PLEKHG4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Puratrophin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Puratrophin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PLEKHG4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Puratrophin 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Puratrophin 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PLEKHG4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PLEKHG4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.