PTEN Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422475-LAC

Il gene Pten del topo codifica PTEN, una fosfatasi a doppia specificità (lipidica e proteica) che controbilancia la segnalazione PI3K defosforilando PIP3 in PIP2, limitando così l’attività della via AKT/mTOR. Regolando crescita, sopravvivenza, metabolismo e migrazione cellulari, PTEN contribuisce a mantenere l’omeostasi tissutale e a preservare la stabilità genomica in molteplici contesti cellulari. Alterazioni del dosaggio di PTEN o dell’output di segnalazione sono associate a programmi proliferativi aberranti e a fenotipi immunitari e neuronali modificati, rendendolo un nodo centrale negli studi sulla segnalazione oncogenica e sulla biologia dello sviluppo. PTEN interagisce inoltre con vie che controllano autofagia, polarità cellulare e risposte al danno del DNA, favorendo l’analisi meccanicistica del crosstalk tra pathway.

Le particelle di attivazione lentivirale PTEN (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pten in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PTEN (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pten, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PTEN. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pten e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.