PSS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404133-ACT

ヒトPTDSS2は、ホスファチジルセリン合成酵素2（PSS2）をコードしており、ホスファチジルエタノールアミンとの塩基交換反応によってホスファチジルセリンの産生を触媒する小胞体膜酵素です。PSS2は細胞内ホスファチジルセリン量を制御することで、膜の生合成、オルガネラの恒常性、小胞輸送、ならびにアポトーシスや貪食によるクリアランスに影響する脂質依存的シグナル伝達過程の調節に寄与します。PTDSS2活性は、リン脂質リモデリング経路および小胞体―ミトコンドリア間の脂質交換と密接に関連し、ミトコンドリア機能や細胞ストレス応答を形作ります。ホスファチジルセリン代謝の破綻は、がんにおける増殖・生存形質の変化や、より広範な代謝・神経生物学に関連する膜機能異常と結び付けられており、そのためPTDSS2は機構解明研究に有用な標的となっています。

PSS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTDSS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTDSS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTDSS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTDSS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTDSS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。