PSMD7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405949-ACT

PSMD7 (subunidade 7 não-ATPase do proteassoma 26S) é um componente central da partícula reguladora 19S do proteassoma 26S humano, contribuindo para a degradação de proteínas dependente de ubiquitina e para a manutenção da proteostase celular. Ao apoiar o reconhecimento e o processamento de substratos poliubiquitinados, PSMD7 influencia vias ligadas à progressão do ciclo celular, às respostas ao estresse e ao controle de qualidade proteica, incluindo a degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) e eventos de sinalização mediados pelo proteassoma. Alterações na atividade de subunidades reguladoras do proteassoma podem remodelar a degradação de proteínas regulatórias-chave, impactando programas transcricionais e respostas adaptativas ao estresse proteotóxico. A desregulação de componentes do sistema ubiquitina–proteassoma, incluindo PSMD7, é frequentemente estudada no contexto de sinalização proliferativa, manutenção do genoma e desequilíbrio de proteostase associado a doenças.

PSMD7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMD7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSMD7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMD7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMD7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSMD7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMD7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSMD7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSMD7 em células tumorais com expressão de PSMD7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.