PSGL-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401534-ACT

SELPLG codifica o ligante glicoproteico da P-selectina-1 (PSGL-1), um recetor de adesão do tipo mucina expresso de forma proeminente em leucócitos, que medeia a adesão inicial e o rolamento sobre endotélio ativado através da ligação a selectinas. O PSGL-1 integra motivos de reconhecimento dependentes de glicosilação com sinalização intracelular para coordenar o tráfego de leucócitos, a formação da sinapse imunitária e o recrutamento inflamatório. Este eixo cruza-se com a inflamação vascular e com a regulação imunitária inata/adaptativa, influenciando vias que moldam as respostas de citocinas e as interações célula–célula. Alterações desreguladas na função e na expressão de SELPLG/PSGL-1 têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e autoimunes, bem como à dinâmica do microambiente tumoral–imunitário, tornando-o um nó relevante para estudos mecanísticos em imunologia e oncologia.

PSGL-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELPLG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSGL-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELPLG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELPLG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSGL-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELPLG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSGL-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSGL-1 em células tumorais com expressão de SELPLG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.