PRX II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401330-ACT

PRDX2 codifica a peroxirredoxina-2 humana (PRX II), uma peroxidase citosólica dependente de tióis que reduz o peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos orgânicos, ajudando a manter a homeostase redox celular. Ao controlar o “tom” de peróxidos e a sinalização mediada por tióis, a PRX II influencia vias sensíveis a ROS que regulam proliferação, apoptose e respostas inflamatórias, incluindo a modulação redox de programas associados a MAPK, NF-κB e Nrf2. A PRX II também contribui para a defesa antioxidante em eritrócitos e em outros contextos de alta carga oxidativa, vinculando sua atividade a fenótipos de estresse oxidativo. Alterações na expressão de PRDX2 ou na função da PRX II têm sido associadas ao desequilíbrio redox observado em modelos de biologia do câncer, neurodegeneração e doenças cardiovasculares e inflamatórias, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de sinalização oxidativa.

PRX II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX II em células tumorais com expressão de PRDX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.