protein 4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406824

概要

EPB42は赤血球膜タンパク質4.2をコードしており、band 3（SLC4A1）複合体をスペクトリン‐アクチンの接合部ネットワークに連結することで赤血球膜を安定化させる、細胞骨格アダプターとして機能します。タンパク質4.2は、膜の凝集性、両凹円盤状の細胞形態、ならびに微小血管通過時の機械的耐性を支え、膜の組織化やイオン輸送の恒常性を制御する経路に組み込まれています。EPB42の異常は赤血球膜の完全性を損ない、遺伝性溶血性疾患でみられる赤血球脆弱性の表現型と関連することから、細胞骨格の組み立てと溶血関連の病態生理を結び付ける機序的な手掛かりを提供します。そのため本遺伝子は、膜‐細胞骨格相互作用、タンパク質複合体の化学量論、ならびに赤芽球系生物学におけるストレス応答を解析する目的で広く用いられています。

protein 4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEPB42遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EPB42内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EPB42のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、protein 4.2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、protein 4.2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EPB42欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• protein 4.2の機能に不可欠なEPB42エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EPB42ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• protein 4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびprotein 4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EPB42遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  protein 4.2 HDRプラスミド（h）および protein 4.2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEPB42ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEPB42標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。