Prokineticin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403930-ACT

O gene humano **PROK2** codifica a **procineticina-2**, um peptídeo secretado semelhante a quimiocina que sinaliza principalmente por meio dos receptores acoplados à proteína G **PROKR1** e **PROKR2**, regulando o fluxo de cálcio, a atividade de **MAPK/ERK** e programas transcricionais a jusante. O **PROK2** contribui para a sinalização neuroendócrina e relacionada ao ritmo circadiano, para a migração e sobrevivência neuronal e para a modulação da quimiotaxia de células inflamatórias e de respostas vasculares. No sistema nervoso central, a procineticina-2 está associada ao desenvolvimento do bulbo olfatório e ao controle hipotalâmico da reprodução via função de neurônios de **GnRH**, enquanto em tecidos periféricos pode influenciar o tráfego de leucócitos e vias associadas à dor. Alterações na sinalização **PROK2/PROKR** têm sido associadas ao hipogonadismo hipogonadotrófico congênito e à síndrome de Kallmann, e são frequentemente investigadas em estudos de neuroinflamação, regulação angiogênica e sinalização no microambiente tumoral, sem implicar desfechos clínicos.

Prokineticin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PROK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Prokineticin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PROK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PROK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Prokineticin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PROK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Prokineticin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Prokineticin-2 em células tumorais com expressão de PROK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.