PRL-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400814-ACT

PRLR codifica o receptor humano de prolactina (PRL-R), um receptor de citocinas do tipo I que medeia a sinalização da prolactina para regular a diferenciação epitelial, a expressão de genes lactogênicos e a homeostase tecidual. A dimerização do receptor dependente de ligante ativa JAK2/STAT5, bem como as vias PI3K–AKT e MAPK/ERK, integrando programas transcricionais e de sobrevivência em diferentes tipos celulares responsivos a hormônios. A desregulação da sinalização via PRL-R tem sido associada a alterações de proliferação, diferenciação e crosstalk inflamatório em múltiplos tecidos, tornando o PRLR um alvo amplamente estudado na biologia regulada por hormônios. A expressão de PRLR e a atividade da via são frequentemente investigadas em modelos de biologia da mama e da próstata, regulação metabólica e modulação imune, para esclarecer dependências de sinalização específicas do contexto.

PRL-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRLR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRL-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRLR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRLR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRL-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRLR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRL-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRL-R em células tumorais com expressão de PRLR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.