Prealbumin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401083

概要

ヒトTTRは、プレアルブミン（トランスサイレチン）をコードしている。プレアルブミンは分泌性の四量体キャリアタンパク質で、サイロキシン（T4）を運搬し、またレチノール結合タンパク質に結合することでレチノール（ビタミンA）も運搬し、内分泌ホルモンの分布とビタミンA恒常性の維持を支えている。プレアルブミンは主に肝細胞で合成され、脈絡叢でも発現しており、血漿と脳脊髄液の区画間におけるタンパク質およびホルモンの輸送に寄与する。その生物学的機能は、分泌経路のプロテオスタシス、細胞外タンパク質のターンオーバー、ならびに全身の代謝シグナル伝達に影響を与えるリガンド結合ダイナミクスと交差している。TTRの折りたたみ異常や凝集の制御不全はアミロイド沈着疾患と関連しており、発現量や安定性の変化は、肝機能、甲状腺ホルモンの取り扱い、タンパク質ミスフォールディング機構の研究に有用な知見を与えうる。

Prealbumin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTTR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TTR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TTRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Prealbuminタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Prealbuminシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TTR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Prealbuminの機能に不可欠なTTRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TTRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Prealbumin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPrealbumin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TTR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Prealbumin HDRプラスミド（h）および Prealbumin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTTRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTTR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。