Prealbumin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401083-ACT

Das humane **TTR** kodiert Präalbumin (Transthyretin), ein sezerniertes Homotetramer, das Thyroxin (T4) transportiert und Retinol über die Interaktion mit dem Retinol-bindenden Protein befördert; dadurch unterstützt es die endokrine Hormonverteilung und die Vitamin‑A‑Homöostase. TTR wird überwiegend von Hepatozyten und dem Epithel des Plexus choroideus produziert und trägt zum Proteintransport in Plasma und Liquor cerebrospinalis bei. Störungen der TTR-Expression, -Faltung oder Tetramerstabilität sind mit extrazellulärer Proteinaggregation und Gewebedysfunktion verknüpft, weshalb TTR häufig als Modell zur Untersuchung von Proteostase, Sekretion und Amyloidbiologie dient. Die Regulation von TTR liefert zudem Einblicke in hepatische Transkriptionsprogramme und stressresponsive Signalwege, die die Qualitätskontrolle sezernierter Proteine beeinflussen.

Prealbumin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TTR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Prealbumin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TTR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TTR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Prealbumin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TTR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Prealbumin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Prealbumin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TTR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.