PRDM11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417861-ACT

PRDM11 codifica uma proteína de dedo de zinco contendo um domínio PR/SET, implicada na regulação da transcrição associada à cromatina e em programas de expressão gênica específicos de linhagem. Como membro da família PRDM, PRDM11 está ligada a mecanismos de controle epigenético que coordenam transições de estado celular, incluindo a diferenciação e a manutenção da identidade celular. A desregulação de reguladores transcricionais da família PRDM tem sido associada a vias de desenvolvimento alteradas e a redes aberrantes de expressão gênica no câncer e em outros distúrbios, o que motiva a investigação de circuitos transcricionais dependentes de PRDM11. O estudo da função de PRDM11 apoia trabalhos mecanísticos sobre remodelamento de cromatina, recrutamento de fatores de transcrição e controle dependente do contexto de genes-alvo a jusante.

PRDM11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDM11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRDM11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDM11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDM11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRDM11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDM11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRDM11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRDM11 em células tumorais com expressão de PRDM11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.