PRAME CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404682-ACT

PRAME（preferentially expressed antigen in melanoma）は、がん精巣抗原（cancer-testis antigen）をコードし、主として転写調節因子として機能します。特に、レチノイン酸受容体シグナルを抑制し、レチノイドによって駆動される分化プログラムを減弱させることで知られています。核内受容体依存的な転写と、それに伴うエピジェネティック制御を調節することにより、PRAMEは細胞周期の進行、系譜決定、ならびにアポトーシス関連遺伝子の発現に影響し得ます。PRAMEの異常発現は複数の腫瘍文脈で報告されており、がん化状態、免疫認識、腫瘍細胞の可塑性に関する研究において、分子マーカーとして頻繁に利用されています。ヒト細胞モデルでは、PRAMEの改変（摂動）により、転写ネットワークや分化シグナルの変化が悪性形質や抗原発現プロファイルにどのように寄与するかを検討できます。

PRAME CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRAMEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRAME CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRAME 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRAME転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRAMEの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRAME遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRAME依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRAME発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRAME経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。