PPP1R15B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408988-ACT

PPP1R15B (também conhecido como CReP) codifica uma subunidade regulatória que direciona a fosfatase de proteínas 1 (PP1) para desfosforilar a eIF2α, atuando como um contrapeso fundamental à repressão traducional induzida por estresse. Ao promover a desfosforilação de eIF2α, o PPP1R15B ajuda a restaurar a síntese global de proteínas após perturbações e modula a sinalização da resposta integrada ao estresse (ISR), que se cruza com o estresse do RE, a proteostase e programas de sobrevivência celular. Esse controle direcionado por PP1 influencia vias downstream de adaptação transcricional e metabólica governadas por redes dependentes de ATF4/CHOP. A desregulação da dinâmica de fosforilação de eIF2α e do ajuste fino da ISR tem sido implicada em diversos contextos, incluindo neurodegeneração, estresse metabólico e adaptação de células cancerosas, tornando o PPP1R15B um nó útil para estudos mecanísticos de resiliência ao estresse.

PPP1R15B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP1R15B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PPP1R15B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP1R15B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP1R15B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PPP1R15B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP1R15B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PPP1R15B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PPP1R15B em células tumorais com expressão de PPP1R15B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.