PPARβ Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400523-LAC

PPARD codifica il recettore attivato dai proliferatori dei perossisomi beta/delta (PPARβ), un recettore nucleare attivato da ligandi che eterodimerizza con RXR per regolare programmi trascrizionali che controllano l’utilizzo dei lipidi, l’ossidazione degli acidi grassi, il metabolismo energetico mitocondriale e la differenziazione cellulare. PPARβ integra segnali metabolici e infiammatori attraverso gli elementi di risposta ai PPAR, intersecandosi con vie come AMPK, PI3K–AKT e MAPK per modulare la sopravvivenza cellulare e le risposte allo stress. In diversi tessuti, PPARD influenza la gestione del glucosio, l’omeostasi lipidica e la polarizzazione delle cellule immunitarie, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sulla disregolazione metabolica, l’infiammazione cronica e i ruoli dipendenti dal contesto nella segnalazione oncogenica. Alterazioni dell’attività di PPARD sono state associate a cambiamenti nel metabolismo ossidativo, nella capacità proliferativa e nella funzione di barriera, a supporto della sua rilevanza nella ricerca sui meccanismi di malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARβ (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PPARD in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARβ (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PPARD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PPARβ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PPARD e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.