POU3F4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422353-ACT

Pou3f4 codifica o POU3F4, um fator de transcrição POU-homeobox que coordena programas de expressão gênica durante o desenvolvimento embrionário, com papéis marcantes no padrão do mesênquima ótico e no neurodesenvolvimento. Ao se ligar a motivos de DNA semelhantes ao octâmero, o POU3F4 regula redes transcricionais específicas de linhagem que influenciam decisões de destino celular, morfogênese tecidual e o timing de diferenciação. Em modelos murinos, a atividade alterada de Pou3f4 perturba o desenvolvimento do ouvido interno e a conectividade neuronal, tornando-o relevante para estudos sobre a formação do sistema sensorial e o controle transcricional do desenvolvimento. A disfunção do ortólogo humano está associada à deficiência auditiva ligada ao X, sustentando investigações translacionalmente alinhadas sobre mecanismos conservados da fisiopatologia auditiva.

POU3F4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pou3f4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

POU3F4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pou3f4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pou3f4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de POU3F4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pou3f4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de POU3F4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via POU3F4 em células tumorais com expressão de Pou3f4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.