PORCN Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413044-LAC

Il gene umano **PORCN** codifica una O-aciltransferasi di membrana localizzata nel reticolo endoplasmatico che catalizza la palmitoleoilazione dei ligandi WNT, una modifica necessaria per la secrezione dei WNT, l’interazione con i recettori e la formazione di gradienti di WNT. Controllando la maturazione dei ligandi WNT, PORCN regola sia la trascrizione canonica dipendente dalla β-catenina sia la segnalazione WNT non canonica/di polarità cellulare planare, influenzando proliferazione, differenziamento, polarità e patterning dei tessuti. L’alterazione della segnalazione WNT dipendente da PORCN è implicata in disturbi dello sviluppo e in contesti patologici in cui l’attività della via WNT è deregolata, inclusi tumori e rimodellamento fibrotico. In quanto nodo a monte e limitante la velocità nella produzione dei ligandi WNT, PORCN è un bersaglio utile per studi meccanicistici sull’output della via e sulla dinamica della segnalazione paracrina.

Le particelle di attivazione lentivirale PORCN (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PORCN in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PORCN (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PORCN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PORCN. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PORCN e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.