Polycystin-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400669-NIC

PKD2はポリシスチン2（polycystin-2）をコードしており、これはCa2+透過性のTRP様イオンチャネルで、一次繊毛、小胞体、その他の膜系コンパートメントに局在して細胞内カルシウムシグナル伝達を制御します。ポリシスチン2は、機械感覚・化学感覚からの入力を、上皮の極性形成、尿細管形成、流体流の感知を制御する経路と統合し、また繊毛シグナル伝達ネットワークにおいてポリシスチン1と機能的に連携します。カルシウム依存性の転写・代謝プログラムを調節することで、PKD2は細胞周期の進行、平面内細胞極性、細胞外マトリックスの再構築に影響を与えます。PKD2の制御異常は嚢胞形成と強く関連し、常染色体優性多発性嚢胞腎（ADPKD）および関連する肝腎表現型の病態形成に寄与します。

Polycystin-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PKD2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PKD2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PKD2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PKD2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。