Polycystin-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400983-LAC

PKD1 codifica la policistina-1, una grande proteina di membrana con caratteristiche da recettore che forma un complesso meccanosensoriale con la policistina-2 per regolare la segnalazione del calcio nelle ciglia primarie e alle giunzioni cellula–cellula. La policistina-1 influenza la polarità epiteliale, la morfogenesi tubulare e le interazioni con la matrice extracellulare, integrando segnali che convergono su vie quali la segnalazione Ca2+-dipendente, la modulazione del cAMP e il rimodellamento del citoscheletro. L’alterazione della funzione di PKD1 è fortemente associata alla malattia policistica renale autosomica dominante, nella quale una meccanotrasduzione e un’organizzazione epiteliale compromesse contribuiscono all’avvio e all’espansione delle cisti. In sistemi più ampi, l’attività di PKD1 viene studiata in relazione all’architettura tissutale, alla segnalazione associata alle ciliopatie e alle risposte cellulari allo stress meccanico.

Le particelle di attivazione lentivirale Polycystin-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PKD1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Polycystin-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PKD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Polycystin-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PKD1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.