PNP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404914

概要

プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（PNP）は、プリン・サルベージ経路に属する細胞質酵素であり、イノシンおよびグアノシンヌクレオシドのリン酸分解反応を触媒して、ヒポキサンチンまたはグアニンを産生し、ヌクレオチドの恒常性維持と再利用を支えています。プリン代謝物のバランスを制御することで、PNPは細胞のエネルギー状態、酸化還元環境、DNA/RNA前駆体の利用可能性に影響を与え、その結果として増殖やストレス応答にも波及します。PNP活性は免疫細胞の代謝において特に重要で、プリンフラックスがリンパ球の生存と機能を調節します。PNPの機能異常や遺伝性欠損は、免疫不全様の表現型やプリン代謝物の異常蓄積と関連しており、代謝に連動した細胞運命決定の機構研究における重要な標的となっています。

PNP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPNP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PNP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PNPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PNPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PNPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PNP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PNPの機能に不可欠なPNPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PNPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PNP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPNP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PNP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PNP HDRプラスミド（h）および PNP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPNPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPNP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。